Buffer hii hutumiwa kwa kujitenga kwa electrophoresis ya DNA
TBE buffer ni muhimu sana kwa kujitenga vipande vidogo vya DNA (MW <1000), kama vile bidhaa ndogo za kuzuia digestion za enzyme .
TBE ina uwezo mkubwa zaidi wa kuimarisha na itatoa azimio kali kuliko buffer ya TAE . Bue ya TAE ni suluhisho la msingi wa Tris, asidi asidi na EDTA (Tris-acetate-EDTA).
TBE kwa ujumla ni ghali zaidi kuliko TAE na inhibitisha DNA ligase, ambayo inaweza kusababisha matatizo ikiwa utaratibu wa DNA ya utakaso na hatua za ligation zinalenga. Kwa hatua tatu rahisi zinazofuata, jifunza jinsi ya kufanya buffer ya TBE. Haipaswi kuchukua zaidi ya dakika 30 kuunda buffer hii. Hapa ndivyo:
Jitayarishe Solution ya hisa ya EDTA
Suluhisho la EDTA (ethylenediamine tetraacetic asidi) linapaswa kuwa tayari kabla ya muda. EDTA haitakwenda kabisa katika suluhisho hadi pH iporekebishwe hadi 8.0. Kwa suluhisho la hisa la mililita 500 ya EDTA 0.5 M, uzito gramu 93.05 ya chumvi ya diso ya EDTA (FW = 372.2). Kisha kuifuta katika mililita 400 ya maji yaliyochafuliwa na kurekebisha pH na NaOH. Baada ya hapo, juu juu ya ufumbuzi kwa kiasi cha mwisho cha mililita 500.
Tengeneza Solution ya Stock ya TBE
Tengeneza ufumbuzi wa hisa wa TBE kwa kuzingatia (5x) kwa uzito wa msingi wa 54 g Tris (FW = 121.14) na asilimia 27.5 ya boric (FW = 61.83) na kufuta wote katika mililita takriban 900 ya maji yaliyosababishwa. Kisha kuongeza mililita 20 ya M EDTA 0.5 M (pH 8.0) na kurekebisha ufumbuzi kwa kiasi cha mwisho cha lita moja.
Suluhisho hili linaweza kuhifadhiwa kwenye joto la kawaida lakini usahihi utaunda katika ufumbuzi wa zamani. Hifadhi buffer katika chupa za kioo na uepotee ikiwa usahihi umeunda.
Tayari Suluhisho la Kazi la TBE
Kwa umeme wa gel electrophoresis, buffer ya TBE inaweza kutumika katika mkusanyiko wa 0.5x (1:10 dilution ya hisa kujilimbikizia). Punguza ufumbuzi wa hisa kwa 10x katika maji yaliyotumiwa. Viwango vya mwisho vya solute ni 45 mM Tris-borate na EDTA 1 mM. Buffer sasa iko tayari kwa kutumia gel ya agarose .
Unachohitaji
Ili kufanya buffer ya TBE, unahitaji vitu vumi tu. Vipengee vilivyobaki kwenye orodha hii ni vifaa. Dutu nne zinahitajika ni chumvi ya disodi ya EDTA, msingi wa Tris, asidi ya boroni na maji yaliyosababishwa.
Kama vifaa, utahitaji kiwango cha pH na kiwango cha calibration, kama inavyofaa. Mbali na hilo, utahitaji beakers 600-milliliter na 1500-milliliter au flasks. Kupindua mahitaji yako ya vifaa ni vifungo vilivyohitimishwa na baa za kuchochea na sahani za kuchochea.
Angalia hesabu kwenye maabara ambayo utatumia kuhakikisha una kila kitu unachohitaji kabla ya kuanza. Hakuna chochote zaidi kuliko kuacha katikati ya kuandaa suluhisho kwa sababu umepoteza vifaa vyenye sahihi.
Ikiwa lababara yako iko shuleni au tovuti yako ya kazi, angalia na wafanyakazi sahihi ili kuona kwamba wana vitu vyote katika hisa. Kufanya hivyo inaweza kuokoa muda na nishati mwishoni.