Jinsi hizi endonuceleases kusimama nje
Je! Unajua kiasi gani kuhusu vikwazo vya enzymes? Pata ufahamu bora wa kile wanachofanya na kwa nini wao ni muhimu, na ukaguzi huu.
Kufafanua Enzymes Vikwazo
Endonucleases ya vikwazo ni darasa la enzyme ambayo hukata molekuli za DNA. Kila enzyme hutambua mlolongo wa pekee wa nucleotides katika mkondo wa DNA. Utaratibu huo ni kawaida kuhusu jozi za msingi za 4 hadi 6 kwa muda mrefu. Utaratibu huo ni palindromic kwa kuwa mkondoni wa DNA ya ziada una mlolongo sawa tu katika mwelekeo wa nyuma.
Kwa maneno mengine, pande zote mbili za DNA hukatwa kwenye eneo moja.
Ambapo Enzymes Hizi Zinapatikana
Vidonge vya uzuiaji hupatikana katika aina nyingi za bakteria ambapo jukumu la kibaiolojia ni kushiriki katika ulinzi wa kiini. Enzymes hizi "huzuia" kigeni (kwa mfano virusi) DNA inayoingia kwenye seli, kwa kuiharibu. Kiini cha jeshi kina mfumo wa udhibiti wa kizuizi ambacho hutengeneza DNA yake mwenyewe kwenye maeneo maalum kwa ajili ya enzymes zake za kuzuia, na hivyo kuilinda kutoka kwa usafi. Zaidi ya 800 zinazojulikana kwa enzymes zimegunduliwa kwamba hutambua utaratibu zaidi wa 100 wa nucleotide.
Tumia katika Bioteknolojia
Enzymes ya kuzuia hutumiwa katika teknolojia ya kibayoteknolojia ili kupunguza DNA katika vipande vidogo ili kujifunza tofauti za urefu wa vipande kati ya watu binafsi (Uzuizi wa Urefu wa Kipande cha Uchoraji wa Fragment - RFLP). Pia hutumika kwa cloning ya jeni.
Mbinu za RFLP zimetumiwa kuamua kwamba watu binafsi au vikundi vya watu binafsi wana tofauti tofauti katika utaratibu wa jeni na mifumo ya uzuiaji wa kizuizi katika maeneo fulani ya genome.
Ujuzi wa maeneo haya ya kipekee ni msingi wa kidole cha DNA . Kila moja ya njia hizi hutegemea matumizi ya electrophoresis ya gel ya ugonjwa wa kutosha kwa ajili ya kujitenga vipande vya DNA. TBE buffer, ambayo inajumuisha msingi wa Tris, asidi ya boroni, na EDTA, hutumika kwa umeme wa gel electrophoresis kuchunguza bidhaa za DNA.
Aina ya Vikwazo vya Enzymes
Kuna aina tatu tofauti za enzymes za kuzuia. Andika Mimi kunapunguza DNA kwenye maeneo ya nusu hadi kufikia jozi 1000 au zaidi kutoka kwenye tovuti ya kutambua. Aina ya kupunguzwa kwa III katika takribani 25 ya msingi ya jozi kutoka kwenye tovuti. Aina ya I na III zinahitaji ATP na inaweza kuwa na enzymes kubwa na vitengo vingi vingi. Aina ya enzymes II, ambayo hutumiwa sana katika teknolojia ya kibayoteknolojia, kata DNA ndani ya mlolongo unaojulikana bila ya haja ya ATP na ni ndogo na rahisi.
Aina II ya vikwazo vya enzymes huitwa kwa mujibu wa aina za bakteria ambazo zinajulikana. Kwa mfano, EcoRI enzyme ilitengwa na E. coli . Wengi wa umma wanafahamu kuzuka kwa E. coli katika chakula.
Aina II ya kuzuia enzymes inaweza kuzalisha aina mbili za kupunguzwa kwa kutegemea kama hukata vipande vyote katikati ya mlolongo wa kutambua au kila kamba karibu na mwisho mmoja wa mlolongo wa utambuzi.
Kukata zamani kutazalisha "mwisho usio" bila overhangs ya nucleotide. Mwisho huzalisha "fimbo" au "ushirikiano" unamalizika kwa sababu kila kipande cha DNA kilicho na kisichozidi kinachopongeza vipande vingine. Yote ni muhimu katika genetics ya molekuli kwa kufanya DNA recombinant na protini.
Aina hii ya DNA inatoka kwa sababu inazalishwa na ligation (kuunganisha pamoja) ya vipande viwili au zaidi ambavyo havikuunganishwa awali.