Jifunze Jinsi ya Kufanya Bue ya TAE katika Hatua Zachache

Buffer Hii Inatumika Kujifunza Mwendo wa DNA

Bue ya TAE ni suluhisho la msingi wa Tris, asidi asidi na EDTA (Tris-acetate-EDTA). Ni historia ya kawaida ya buffer iliyotumiwa kwa electrophoresis ya gel kali katika uchambuzi wa bidhaa za DNA zinazozalishwa na amplification ya PCR , protoksi za utakaso wa DNA au majaribio ya DNA cloning .

Buffer hii ina nguvu ya chini ya ionic na uwezo mdogo wa kukuza. Inafaa zaidi kwa electrophoresis ya vipande vingi vya DNA (> 20 kb) na itahitaji kubadilishwa mara kwa mara au kurejeshwa kwa muda mrefu (> 4 h) mara ya kukimbia gel.

Kwa kuwa katika akili, unaweza kuzingatia makundi kadhaa ya buffer.

Kutokana na kwamba buffer ni rahisi kufanya na hatua zinaweza kufanywa kwa haraka, na kufanya zaidi ya kundi moja kwa wakati haipaswi kuwa wakati wa kutosha au vigumu kuvuta. Kutumia maagizo hapa chini, inapaswa kuchukua muda wa dakika 30 tu ili kufanya buffer ya TAE. Hapa ndivyo:

Jitayarishe Solution ya hisa ya EDTA

Suluhisho la EDTA (ethylenediamine tetraacetic acid) linaandaliwa kabla ya muda. EDTA haitakwenda suluhisho kabisa hadi pH itakapobadilishwa hadi 8.0. Kwa suluhisho la hisa la mililita 500 ya EDTA 0.5 M, uzito gramu 93.05 ya chumvi ya diso ya EDTA (FW = 372.2). Punguza maji mililita 400 ya maji yaliyochafuliwa na kurekebisha pH na hidroksidi ya sodiamu (NaOH). Juu juu ya ufumbuzi wa kiasi cha mwisho cha mililita 500.

Kuinua Solution ya hisa ya TAE

Fanya suluhisho la hisa la kujilimbikizia (50x) la TAE kwa uzito wa gramu 242 za msingi wa Tris (FW = 121.14) na kuifuta katika mililita takriban 750 za maji yaliyosababishwa.

Kwa makini kuongeza mililita 57.1 ya asidi ya glacial na mililita 100 ya 0.5 M EDTA (pH 8.0). Baada ya hayo, tengeneze ufumbuzi kwa kiasi cha mwisho cha lita moja. Suluhisho hili la hisa linahifadhiwa kwenye joto la kawaida. PH ya buffer hii haijabadilishwa na inapaswa kuwa kuhusu 8.5.

Tayari Suluhisho la Kazi la TAE

Suluhisho la kufanya kazi ya buffer ya 1x TAE inafanywa kwa kupunguza tu suluhisho la hisa kwa 50x katika maji yaliyotumiwa.

Viwango vya mwisho vya solute ni mm 40. Tris-acetate na EDTA 1 mM. Buffer sasa iko tayari kwa kutumia gel ya agarose.

Nini Unahitaji kwa Buffer

Kwa kuwa kufanya buffer ya TAE inahitaji tu kuweka haraka na rahisi ya maelekezo, idadi ya vifaa vinavyohitajika kwao si nyingi. Unahitaji tu chumvi la diso la EDTA, msingi wa Tris, na asidi glacial acetiki.

Kufanya buffer pia inahitaji kiwango cha pH na kiwango cha calibration, kama inafaa. Unahitaji pia mililita 600 na milioni 1500 za beakers au flasks pamoja na mitungi ya kufuzu. Hatimaye, utahitaji maji yaliyotumiwa na maji, vikombe vya koroga, na sahani za kuchochea.

Kufunga Up

Unapanga mpango wapi kufanya buffer - kwenye tovuti ya shule, tovuti ya kazi, au mahali pengine, kama vile nyumba yako? Angalia hesabu kabla ya kuanza kuhakikisha una vifaa vyote hapo juu kwa buffer ya TAE.

Ikiwa ungependa si kulipia vifaa, ukiamua kufanya buffer nje ya nyumba yako inashauriwa. Unaweza urahisi utaratibu wa vifaa unavyohitaji mtandaoni au tembelea duka maalum kwao.