Jinsi ya Kufanya Hii Kuzuia Kinga ya Immunohistochemical
Saluni iliyosababishwa na phosphate (PBS) ni suluhisho la buffer ambayo hutumiwa mara kwa mara kwa uchafu wa immunohistochemical (IHC) na mara nyingi hutumiwa katika utafiti wa kibiolojia. PBS ni suluhisho la chumvi la maji yenye sodiamu hidrojeni phosphate, kloridi ya sodiamu na, wakati mwingine, kloridi ya potasiamu na dihydrogen phosphate ya potasiamu.
Singa ya Immunohistochemical
Immunohistochemistry inahusu mchakato wa kuchunguza antigens kama vile protini katika seli za sehemu ya tishu kwa kutumia kanuni ya antibodies kumfunga hasa kwa antigens katika tishu za kibiolojia.
Madoa ya kinga ya kawaida ya mara kwa mara ilikuwa njia ya kwanza ya uchafu wa immunohistochemical.
Antigens huonekana wakati wa kuambukizwa na antibodies kwa kutumia dyes fluorescence kutokana na majibu ya antigen-antibody binding Utaratibu huu hutokea wakati ni kuanzishwa na kusisimua mwanga wa wavelength maalum chini ya microscope fluorescent.
Vipimo vya osmolarity na ion ya ufumbuzi vinavyofanana na yale ya mwili wa binadamu-ni isotonic.
Recipe ya PBS
Unaweza kujiandaa PBS kwa njia kadhaa. Kuna aina nyingi. Baadhi yao hawana potasiamu, wakati wengine vyenye kalsiamu au magnesiamu .
Kichocheo hiki ni rahisi. Ni kwa ufumbuzi wa hisa wa PBS 10X (0.1M). Hata hivyo, unaweza pia kufanya suluhisho la hisa la 1X, au kuanza na kichocheo hiki cha 10X na uinyoe kwa 1X.
Mchakato wote unachukua dakika 10.
Chaguo la kuongeza Tween pia hutolewa.
Nini Utahitajika Kufanya PBS Buffer
- Sodium phosphate monobasic (anhydrous)
- Sodium phosphate dibasic (anhydrous)
- Chloride ya sodiamu
- Kiwango na kupima boti
- Magnetic stirrer na kuchochea bar
- Probe ya pH ambayo ni calibrated na sahihi ya ufumbuzi wa kurekebisha pH
- 1L flask ya volumetric
- Tween 20 (hiari)
Jinsi ya Kufanya Phosphate Buffered Saline (PBS)
Kupima 10,9g asidi ya sodium phosphate dibasic (Na2HPO4), 3.2g asidi ya sodium phosphate monobasic (NaH2PO4), na 90g ya kloridi ya sodiamu (NaCl).
Futa katika maji chini ya 1L yaliyotumiwa.
Kurekebisha pH hadi 7.4 na kufanya suluhisho hadi kiasi cha mwisho cha 1L.
Punguza 10X kabla ya kutumia na kurekebisha pH ikiwa ni lazima.
Unaweza kufanya ufumbuzi wa PBS una asilimia 0.5 ya Tween 20 kwa kuongeza 5mL Tween 20 hadi suluhisho la 1L.
Vidokezo vya Kufanya PBS Buffer
Hifadhi buffer kwenye joto la kawaida baada ya kufanya ufumbuzi wa PBS.
Reagents isiyo ya anhydrous inaweza kubadilishwa lakini itabidi uelezee molekuli inayofaa ya kila mmoja ili kuzingatia molekuli ya maji iliyoongezwa.
Matumizi ya Phosphate Buffered Saline (PBS)
Phosphate iliyofanywa salini ina matumizi mengi kwa sababu ni isotonic na yasiyo ya sumu kwa seli nyingi. Inaweza kutumika kwa kuondokana na vitu na mara nyingi hutumiwa kuosha vyombo vya seli. PBS inaweza kutumika kama dilutent katika mbinu mbalimbali kwa kukausha biomolecules kwa sababu molekuli ya maji ndani yake itakuwa muundo karibu na protini, kwa mfano. Itakuwa "kavu" na immobilized kwa uso imara.
PH inabaki thabiti na thabiti ili kuzuia uharibifu wa seli.
Filamu nyembamba ya maji ambayo inafunga kwa dutu hii inazuia denaturation au mabadiliko mengine conformational. Vipu vya kaboni vinaweza kutumika kwa madhumuni sawa lakini kwa ufanisi mdogo.
PBS pia inaweza kutumika kuchukua wigo wa kutafakari wakati wa kupima adsorption ya protini katika ellipsometry.